ارزیابی ایمنی زایی پلاسمید کدکننده پروتئین میکرونم (mic3) توکسوپلاسما گوندی درموش balb/c

توکسوپلاسما گوندی یک انگل تک یاخته ای داخل سلولی است که موجب بیماری توکسوپلاسموز در انسان و حیوان میشود. انگل انتشارجهانی داشته و حدودیک سوم از انسانها سرم مثبت هستند. عفونتهای توکسوپلاسمایی در اکثر افراد سالم فاقد علامت بوده ولی در افراد با سیستم ایمنی ضعیف علائم شدیدتری ایجاد می کند. انگل توکسوپلاسما همانند سایر ارگانیسم های تک سلولی متشکل از آنتی ژنهای ایمنوژنیک فراوانی است. با وجود اینکه ممکنست آنتی ژنهای دفعی – ترشحی بهترین نوع آنتی ژن برای تحریک پاسخهای ایمنی سلولی و در نتیجه کاندید مناسبی برای تهیه واکسن بر علیه توکسوپلاسموز باشند ولی مطالعات اندکی بر روی آنها انجام شده است. در این مطالعه ما پروتئین میکرونم3(mic3) توکسوپلاسما گوندی را بصورت dna واکسن تهیه نموده و مورد ارزیابی قرار دادیم. در این تحقیق پس از استخراج dna ژنومی از انگل به روش فنل-کلروفرم و جداسازی و تکثیر ژن کد کننده mic3 با روش pcr، محصول pcr در ptz57r/t کلون گردیده و سپس تعیین توالی شد. نتایج نشان داد که که قطعه bp1052 در پلاسمید مذکور کلون شده و قطعه کلون شده ژن mic3 توکسوپلاسما گوندی است. ژن کلون شده ازنظر توالی نوکلئوتیدی با شماره jf330835.1 استرین rh 100% و با شماره aj132530.1 همین استرین 98% شباهت دارد. سپس این ژن در pcdna3 ساب کلون گردیده و بعد از ترانسفکت کردن این پلاسمید نو ترکیب در سلول یوکاریوتیک( cho ) بیان این ژن به روشsds-page و western blotting تایید شد. در این مطالعه به منظور بررسی پاسخهای ایمنی هومورال و سلولی 70 موش balb/c ماده inbred با پلاسمید حاوی این ژن ایمن سازی شدند. ایمونیزاسیون 3 بار به فواصل 3 هفته ای انجام شد. نتایج بدست آمده نشان داد که میزان بقاء موش ها یی که با پلاسمید ریکامبینانت ایمن سازی شدند با گروه کنترل اختلاف معنی دار دارند. اندازه گیری igg و اندازه گیری ایزوتایپ igg2a نیز اختلاف معنی دار را بین گروههای مورد و کنترل تایید کرد(p?0.05). اندازه گیری ifn-? نشان دهنده مقادیر بالایی از این سایتوکائین بوده ولی اندازه گیری il4 نشان دهنده مقدار پایین این سایتوکائین است. با توجه به نتایج، dna واکسن حاوی ژن mic3 قادر به ایجاد مقاومت بر علیه توکسوپلاسما می باشد. همچنین یافته های این مطالعه نشان داد که استفاده از آدجوانت ژنتیکی il- 12همراه با dna واکسن حاوی mic3 تغییر معنی دار در پاسخهای ایمنی در بعضی گروه ها ایجاد می کند.